برخی ویژگی های بیوشیمیایی آلفا- آمیلازهای گوارشی Anagasta kuehniella (Zeller) (Lepidoptera: Pyralidae) و اثرات مهارکنندگی سه عصاره‌ی پروتئینی روی فعالیت آن‌ها

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 دانشجوی کارشناسی ارشد رشته‌ی حشره شناسی کشاورزی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده‌ی کشاورزی دانشگاه تبریز

2 استاد گروه گیاه‌پزشکی، دانشکده‌ی کشاورزی، دانشگاه تبریز.

3 دانشجوی دکتری رشته حشره شناسی کشاورزی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده‌ی کشاورزی دانشگاه تبریز.

چکیده

چکیده
شب پره­ی مدیترانه­ای آرد،  Anagasta kuehniella (Zeller) (Lep.; Pyralidae) با تغذیه از آرد سبب کاهش کیفیت نان تولیدی می­شود. ایجاد اختلال در دستگاه گوارش حشرات با استفاده از مهارکننده­های آنزیم­های گوارشی که از گیاهان تراژن استخراج می­شوند، یکی از روش­های کنترل محسوب می­شود. در این مطالعه، اثر عصاره­ها­ی پروتئینی گندم ارقام سیوند، سرداری و تریتیکاله روی فعالیت آلفا- آمیلازهای لاروهای سنین چهارم و پنجم شب پره­ی مدیترانه­ای آرد بررسی شد. برای استخراج پروتئین از بذرها، آمونیوم سولفات 70 درصد مورد استفاده قرار گرفت. اسیدیته و دمای بهینه­ی فعالیت آلفا- آمیلاز به ترتیب 10 و 40 درجه­ی سانتی­گراد به دست آمد. طبق نتایج حاصل، بالاترین غلظت عصاره‌های پروتئینی ارقام گندم سیوند و سرداری (13میکروگرم پروتئین بر میلی­لیتر) و تریتیکاله (16 میکروگرم پروتئین بر میلی­لیتر) فعالیت آنزیم را به ترتیب 08/73، 07/71 و 88/65 درصد در لاروهای سن پنجم و 16/58، 14/42 و 25/50 درصد در لاروهای سن چهارم کاهش دادند. در پایین­ترین غلظت عصاره­های پروتئینی گندم ارقام سیوند و سرداری (812/0 میکروگرم پروتئین بر میلی­لیتر) و تریتیکاله (یک میکروگرم پروتئین بر میلی­لیتر) نیز فعالیت آنزیم را به ترتیب93/19، 8/17 و 26/25 درصد در لارو سن پنجم و 78/11، 81/12 و 09/10 درصد در لارو سن چهارم کاهش دادند. در ژل زایموگرام بدون استفاده از مهارکننده تنها یک باند مشاهده شد. در بالاترین غلظت عصاره­ها، در لاروهای سن پنجم، باند آمیلازی ناپدید شد و در لاروهای سن چهارم، وضوح باند کم­تر شد. با کاهش دز مهارکننده­ها، وضوح باندها افزایش یافت. طبق نتایج به دست آمده، عصاره­های پروتئینی ارقام سیوند، سرداری و تریتیکاله پتانسیل خوبی برای کاهش فعالیت آمیلازی در لارو آفت مورد نظر داشته و می‌تواند در برنامه‌های مدیریت این آفت در آینده مورد استفاده قرار گیرد.
 

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Some Biochemical Characters of Gut α-amylases of Anagasta kuehniella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae) and Inhibitory Effects of Three Proteinaceous Extracts on Their Activities

نویسندگان [English]

  • Akram Moghadami 1
  • Reza Farshbaf 2
  • Sima Majidiani 3
1 Former MSc. Student of Agricultural Entomology, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Tabriz, Tabriz, Iran.
2 Professor, Department of Plant Protection, Faculty of Aagriculture, University of Tabriz, Tabriz, Iran.
3 Ph.D. Student of Agricultural Entomology, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Tabriz, Tabriz, Iran.
چکیده [English]

Abstract
Anagasta kuehniella Zeller (Lepidoptera: Pyralidae) causes the quality loss of the bread by feeding on flour. Disruption in insect’s digestive enzymes through transgenic plants, expressing enzyme inhibitors, is a methods of pest control. So, the aim of the current study was to investigate the inhibitory effects of proteinaceous extracts of two varieties of wheat (Sivand, Sardari) and Triticale against activity of digestive α-amylase of fourth (L4) and fifth (L5) instars larvae of A.kuehniella. Ammonium sulfate (70%) was used to extract proteins from seeds. The optimal temperature and pH of α-amylase activity was found 40°C and 10, respectively. The results showed that the highest dose of proteinaceous extracts of Sivand and Sardari (13 µg ml-1 protein) and Triticale (16 µg ml-1 protein) reduced the enzyme activity, 73.08%, 71.07% and 65.88% of L5 and 58.16%, 42.14% and 50.25% of L4, respectively. The lowest dose of proteinaceous extracts of Sivand and Sardari (0.812 µg ml-1 protein) and Triticale (1 µg ml-1 protein) inhibited the enzyme activity, 19.93%, 17.8% and 25.26% of L5 and 11.78%, 12.81% and 10.09% of L4, respectively. In the gel electrophoresis of enzyme without usage of inhibitors, one band was observed. At the highest dose of extracts, in the L5, amylase band disappeared and in the L4, waned band clearly. Band resolution was increased by reducing inhibitor dose. It was concluded that Sivand, Sardari and Triticale proteinaceous extracts can be used for management of A.kuehniella.
 

کلیدواژه‌ها [English]

  • Keywords: α-amylase
  • Anagasta kuehniella
  • Enzyme Inhibitors
  • Proteinaceous Extract
منابع
اسمعیلی، م. و بندانی، ع. 1395. اثر عصاره پروتئینی تریتیکاله روی فعالیت آلفا آمیلاز گوارشی شب­پره مینوز گوجه‌فرنگی  Tuta absoluta Meyrick (Lep.: Gelechiidae). تحقیقات آفات گیاهی. شماره دو. صفحه­های 12-1.  
عبدالاحدی ف.، کزاری م. نجفی میرک و. 1395. مهار آلفا- آمیلاز گوارشی سن‌معمولی‌گندم Eurygaster integriceps توسط بازدارنده‌های آنزیمی رقم‌های گندم اروند، بهرنگ و هیرمند. فنآوری زیستی در کشاورزی. جلد پانزدهم.شمارة یک . صفحه­های 42-35.
Bandani AR, Kazzazi M and Mehrabadi M, 2009. Purification and characterization of midgut α-amylases of Eurygaster integriceps. Entomological Science 12: 25–32.
Bernfeld P, 1955. Amylases, alpha and beta. Methods in Enzymology 1: 149-158.
Bradford M, 1976. A rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry 72: 248-254.
Dastranj M and Bandani AR, 2012. Effect of proteinaceous extract of triticale seed extract on α-amylase activity of Helicoverpa armigera. Plant Pests Research 2: 49–57.
Dastranj M, Bandani AR and Mehrabadi M, 2013. Age-specific digestion of Tenebrio molitor (Coleoptera: Tenebrionidae) and inhibition of proteolytic and amylolytic activity by plant proteinaceous seed extracts. Journal of Asia-Pacific Entomology 16: 309–315.
Franco OL, Rigden DJ, Melo FR and Grossi De Sa MF, 2002. Plant α‐amylase inhibitors and their interaction with insect α‐amylases. European Journal of Biochemistry 269: 397-412.
Gatehouse AM, Gatehouse JA, Dobie P, Kilminster AM and Boulter D, 1979. Biochemical basis of insect resistance in Vigna unguiculata. Journal of the Science of Food and Agriculture 30: 948-958.
Hosseinkhani S and Nemat-Gorgani M, 2003. Partial unfolding of carbonic anhydrase provides a method for its immobilization on hydrophobic adsorbents and protects it against irreversible thermo inactivation. Enzyme and Microbial Technology 33: 179-184.
Isman MB, 2006. Botanical insecticides, deterrents, and repellents in modern agriculture and an increasingly regulated world. Annual Review of Entomology 51: 45-66.
Kokiladevi E, Manickam A and Thayumanavan B. 2005. Characterization of alpha-amylase inhibitor in Vigna sublobata. Botanical Bulletin of Academia Sinica 46: 189-196.
Kumari B, Sharma P and Nath AK, 2012. Alpha-amylase inhibitor in local Himalyan collections of Colocasia: isolation, purification, characterization and selectivity towards α-amylases from various sources. Pesticide Biochemistry and Physiology 103: 49–55.
Laemmli UK, 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227: 680-685.
Lovei GL and Arpaia S, 2005. The impact of transgenic plants on natural enemies a critical review of laboratory studies. The Netherlands Entomological Society Entomologia Experimentalis et Applicata 114: 1-14.
Majidiani S, Farshbaf Pourabad R and Bandani AR, 2015. Inhibitory effect of proteinaceous extracts of wheat seeds against gut α-amylase activity of Helicoverpa armigera (Hübner)(Lep.: Noctuidea). Archives of Phytopathology and Plant Protection 48 (2): 171-180.
Mehrabadi M, Franco OL and Bandani AR, 2012. Plant proteinaceous α-amylase and proteinase inhibitors and their use in insect pest control. New Perspectives in Plant Protection 11: 229-246.
Pytelková J, Hubert J, Lepšík M, Šobotník J, Šindelka R, Křížková I, Horn M and Mareš M, 2009. Digestive α‐amylases of the flour moth Ephestia kuehniella adaptation to alkaline environment and plant inhibitors. FEBS Journal 276: 3531-3546.
Silva CP, Terra WR, Samuels RI, Isejima EM, Bifano TD and Almeida JS, 2001. Induction of digestive α-amylase in larvae of Zabrotes subfasciatus (Coleoptera: Bruchidae) in response to ingestion of common bean α-amylase inhibitor. Journal of Insect Physiology 47: 1283-1290
Ussuf K, Laxmi N and Mitra R, 2001. Proteinase inhibitors: plant-derived genes of insecticidal protein for developing insect-resistant transgenic plants. Current Science 80: 847-853.
Valencia-Jiménez A, Arboleda Valencia JW and Grossi De Sa MF, 2008. Activity of α-amylase inhibitors from Phaseolus coccineus on digestive α-amylases of the coffee berryborer. Journal of Agricultural and Food Chemistry 56: 2315-2320.
Yildirim A, Mavi A and Kara A, 2001. Determination of antioxidant and antimicrobial activities of Rumex crispus L. extracts. Journal of Agricultural and Food Chemistry 49: 4083-4089.