دانشگاه تبریز پژوهش های کاربردی در گیاهپزشکی 2383-1855 10 3 2021 09 23 Detection and identification of Candidatus phytoplasma trifolii on apple trees in Iran ردیابی و شناسایی Candidatus phytoplasma trifolii از درختان سیب در ایران 41 50 13306 10.22034/arpp.2021.13306 FA رضا برازنده آق کاریز گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زابل ناصر رادمان گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زابل محمودرضا کریمی شهری 2بخش تحقیقات گیاه پزشکی، مرکز تحقیقات و آموزش کشاورزی و منابع طبیعی استان خراسان رضوی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، مشهد، ایران. مهدی پیرنیا گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زابل. عبدالحسین طاهری گروه گیاهپزشکی، داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﻛﺸﺎورزی و ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻃﺒﻴﻌﻲ ﮔﺮﮔﺎن. سیدمهدی فاطمی کارشناس بخش مدیریت آب و خاک، سازمان جهاد کشاورزی استان خراسان رضوی- مشهد Journal Article 2021 07 27 <strong>Abstract</strong><br />During spring and summer of 2018, suspected symptoms of the phytoplasma disease such as leaf shrinkage and yellowing as well as leaves with abnormally-enlarged stipules were observed in apple orchards in Khorasan Razavi province and 33 leaf samples were collected. Samples of symptomatic apple tree were assayed for infection with phytoplasma, using universal primer pairs P1 / P7 and nested PCR using primer pair R16F2n / R16R2, fU5 / rU3 and R16MF2 / R16MR2 in Polymerase Chain Reaction (PCR). The universal PCR products were 1800 bp fragments and the nested-PCR products were 1250, 876 and 1400 bp fragments, respectively, which were amplified by primer pairs. Of 33 leaf samples from apple, 18 samples were tested positive for phytoplasmas. The R16MF2/R16MR2 primed nested PCR products were cloned, sequenced and submitted into GenBank. Comparison of the obtained sequences with the sequences of NCBI using BLAST software and Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis of the nested PCR products using the enzymes <em>AluI</em>, <em>RsaI</em> and <em>TruI</em> (<em>MseI</em>) indicated that phytoplasma in apple trees in Razavi Khorasan province was most similar to <em>Candidatus</em> Phytoplasma trifolii related to Clover Proliferation (CP) 16SrVI group. Analysis of sequences using iPhyClassifier software, determination of nucleotide similarity, and phylogenetic analysis of full-length 16S rDNA showed that phytoplasma in apple tress of Razavi Khorasan province belongs to 16SrVI-A subgroup. This is the first report on <em>Ca.</em> Phytoplasma trifolii infections in apple trees in Iran and other regions across the world.<br />  <strong>چکیده </strong><br />در بازدیدهای بهار و تابستان سال 1397 از باغات درختان سیب در استان خراسان رضوی، علائم مشکوک به بیماری فیتوپلاسمایی مانند زردی، ریزبرگی، و همچنین برگ­ هایی که گوشوارک در آن به طور غیرعادی کشیده شده بود در سطح باغات مشاهده شد و 33 نمونه از برگ درختان جمع­ آوری گردید. با استفاده از آغازگرهای عمومی P1 / P7 و آغازگرهای آشیان ه­ای R16F2n / R16R2، fU5 / rU3 و R16MF2 / R16MR2 در واکنش زنجیره­ای پلیمراز (PCR) از کلیه نمونه­های دارای علائم، قطعات 1800 جفت باز در PCR عمومی و در PCRهای آشیان ه­ای به ترتیب قطعات 1250، 876 و 1400 جفت باز تکثیر شدند. در نتایج حاصله مشخص گردید 18 نمونه آلوده به فیتوپلاسما مثبت بودند. محصول PCR دومرحله­ای با جفت آغازگرهای R16F2n / R16R2، همسانه­سازی و تعیین ترادف شده و در بانک جهانی ژن ثبت گردید. مقایسه توالی­ های به دست آمده با توالی ­های موجود در NCBI توسط نرم افزار BLAST و همچنین بررسی چند شکلی طولی قطعات برشی (RFLP) حقیقی با محصول PCR دومرحله­ ای با استفاده از آنزیم ­های <em>AluI</em><em>، </em> <em>RsaI</em>و <em>Tru1I</em> (<em>MseI</em>)، نشان داد که فیتوپلاسمای همراه درختان سیب بیشترین شباهت را با <em>Candidatus</em> Phytoplasma trifolii مربوط به گروه افژولش شبدر (Clover proliferation group, 16SrVI) دارند. آنالیز توالی­ ها با استفاده از نرم افزار iPhyClassifier، تعیین میزان تشابه نوکلئوتیدی و آنالیز تبارزایی با استفاده از ترادف کامل ژن RNA ریبوزومی 16S نیز تعلق فیتوپلاسمای همراه درختان سیب در استان خراسان رضوی را در گروه 16SrVI-A تایید کرد. این اولین گزارش از سیب­ های آلوده به <em>Ca.</em> Phytoplasma trifolii در ایران و سایر نقاط جهان است.<br />  https://arpp.tabrizu.ac.ir/article_13306_7e22c1748475b8b36de847dad6f3d06f.pdf