شناسایی مولکولی سه گونۀ ویروس در مزارع گوجه فرنگی استان آذربایجان شرقی

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

1 استادیار بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان.

2 دانشیار گروه گیاهپزشکی دانشکده کشاورزی دانشگاه تبریز.

3 استادیار گروه گیاهپزشکی دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه.

چکیده

چکیده
آلودگی به ویروس های شایع مزارع گوجه­فرنگی شامل Cucumber mosaic virus (CMV)،Tomato spotted wilt virus (TSWV) ،Tomato mosaic virus (ToMV)  و Tobacco mosaic virus (TMV) در آذربایجان­شرقی مورد بررسی قرار گرفت. تعداد 205 نمونه دارای علائم موزاییک، کوتولگی، نکروز، باریک شدن، بدشکلی برگ­ها و میوه­ها جمع­آوری و از نظر بررسی علائم، مورد مطالعات گلخانه­ای قرار گرفتند. سپس آزمون الایزا برای ردیابی  CMV روی نمونه­های مشکوک به آلودگی با این ویروس انجام پذیرفت. پس از استخراج RNA کل از نمونه­های آلوده، RT-PCR با آغازگرهای اختصاصی CMV، آغازگرهای عمومی جنس توسپوویروس یا توباموویروس با توجه به علایم ویروسی انجام شد. با بهینه سازی PCR از نظر دمای اتصال، قطعات تکثیر یافته­ی مورد انتظار در تعداد 6، 37 و 23 نمونه به ترتیب با آغازگرهای توسپوویروس، توباموویروس یا CMV حاصل شد. پروفیل برش آنزیمی با HindIII ، EcoRI و XbaI روی قطعات تکثیر یافته با آغازگرهای توسپوویروس از تعداد شش نمونه نشان داد که هویت ویروس در همه­ی آنها TSWV بود. همسانه سازی و تعیین توالی این قطعات نیز ماهیت TSWV بودن جدایه­ها را تایید نمود. قطعات DNA تکثیر یافته با آغازگرهای توباموویروس با TaqI برش داده شدند که طبق پروفیل برشی، آلودگی ­ به ToMV در 37 نمونه محرز شد در حالی که TMV در هیچیک از نمونه ها پیدا نشد. برش محصول PCR حاصل از آغازگرهای CMV با آنزیم MspI هم نشان داد که جدایه­های CMV متعلق به زیر گروه I این ویروس بودند. همچنین، نتایج گویای فراوانی بیشتر آلودگی با CMV و ToMV در نمونه­ ها بود.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Molecular Detection of Three Virus Species in Tomato Fields of Azarbaijan-e-Sharqi Province

نویسندگان [English]

  • davood Koolivand 1
  • Nemat Sokhandan Bashir 2
  • Shahin Sobhi 2
  • Mina Rastgo 3
1 Assistant Professor, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Zanjan, Iran.
2 Associate Professor, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Tabriz, Tabriz, Iran.
3 Assistant Professor, Department of Plant protection, Faculty of Agriculture, University of Urmia, Urmia, Iran.
بی نام، 1394. آمار نامه کشاورزی ایران. اداره کل آمار و اطلاعات وزارت کشاورزی.
Alonso E, Garcia- Luque I, Avila- Rincon MJ, Wicke B, Serra MT, and Diaz- Ruiz, JR, 1989. A tobamovirus causing heavy losses in protected pepper crops in Spain. Journal of Phytopathology 125: 67- 76.
Bananej K, Ahoonmanesh A, Shahraeen N and Lesemann D, 1996. Identification of Tomato spotted wilt virus from tomato fields in Varamin area. Iranian Journal of  Plant Pathology 32: 29-30.
Chiemsombat P, Gajanandana O, Warin N, Hongprayoon R, Bhunchoth A, Pongsapich P, 2008. Biological and molecular characterization of tospoviruses in Thailand. Archives of Virology 153: 571-577.
Chitra TR, Prakash, HS, Albrechtsen SE, Shetty HS, and. Mathur SB, 1999. Infection of tomato and bell pepper by ToMV and TMV at different growth stages and establishment of virus in seeds.  Journal of Plant Pathology
81:123-126
Chu FH, Chao CH, Chung MH, Chen CC and Yeh SD, 2001. Completion of genom sequence of Watermelon silver mottle virus and utilization of degenerate primers for detecting tospoviruses in five serogroups. Phytopathology 91: 361-368.
Crowther J.R. (ed.). 2009. The ELISA Guidebook. 2nd edition, Springer Protocols: Methods in Molecular Biology, Vol. 516 (J. Walker, Series ed.) Humana Press, NJ, USA, 566 pp.
Gallitelli D, 2000. The ecology of cucumber mosaic virus and sustainable agriculture. Virus Research 71:9- 21.
Ghotbi T, Shahraeen N and Winter S, 2005. Occurrence of tospoviruses in ornamental and weed species in Markazi and Tehran provinces in Iran. Plant Disease 89: 425-429.
Golnaraghi A, Shahraeen N, Pourrahim R, Ghorban S and Farzadfar S, 2001. First report of Tomato spotted wilt virus on soybean in Iran. Plant Disease 85: 1290-1290.
Hajiabadi AM, Asaei  F, Abdollahi MB and Rastgou M, 2012. Natural incidence of tomato viruses in the north of Iran. Phytopathologia Mediterranea 51: 390-396.
Hajiabadi AM, Jafarpour B, Rastegar MF and Mandoulakani BA,  2009. Detection of Tomato spotted wilt virus in north-East of Iran. International Journal of Food, Agriculture and Environment 7: 471-474.
Hassani-Mehraban  A, Botermans M, Verhoeven JTJ, Meekes E, Saaijer J, Peters D, Goldbach R and Kormelink R, 2010. A distinct tospovirus causing necrotic streak on Alstroemeria sp. in Colombia. Archives  of Virology 155: 423-428.
Hollings M, Huttinga H, 1976.  Tomato mosaic virus. Description of plant viruses. http://www.dpv.net/ dpvno: 156.
Jones DR, 2005.  Plant viruses transmitted by thrips. European Journal of Plant Pathology 113: 119-157.
Kaye A, Moyer J, Parks E, Carbone I and Cubeta M, 2011. Population genetic analysis of Tomato spotted wilt virus on peanut in North Carolina and Virginia. Phytopathology 101: 147-153.
King A MQ., Andams MJ, Carstens EB, and Lefkowitz EJ, 2012. Virus Taxonomy. Classification and Nomenclature of viruses. Ninth report of the International Committee on Taxonomy of Viruses
Kumar S, Udaya Shankar AC, Nayaka SC Lund OS and Prakash HS, 2011. Detection of Tobacco mosaic virus and Tomato mosaic virus in pepper and tomato by multiplex RT-PCR. Letters in Applied Microbiology 53: 359- 363.
Letschert B, Adam G, Lesemann DE, Willingmann P and Heinze C, 2002. Detection and differentiation of serologically cross-reacting tobamoviruses of economical importance by RT-PCR and RT-PCR-RFLP. Journal of Virological Methods 106: 1- 10.
Massumi H, Shaabanian M, Hosseinipour A, Heydarnejad J and Rahimian H, 2009. Incidence of viruses infecting tomato and their natural hosts in the southest and central regions of Iran. Plant Disease 93: 67- 72.
Mohammadi M, Esmaeeli-far A, Zad J, Mossahebi G, and Okhovat  M, 2000. Serological Detection and Symptomology of Tomato spotted wilt virus in Tehran Province, Iran. Journal of Agricultural Science and Technology  2: 107-117.
Nischwitz C, Mullis S W, Gitaitis R D, and Csinos A S,  2006. First report of Tomato spotted wilt virus in soyabean (Glycine max) in Georgia. Plant Disease 90:524.
Palukaitis P, Roossinck MJ, Dietzgen RG and Francki RIB, 1992. Cucumber mosaic virus. Advanced Virus Research 41:281-348.
Pappu HR, Toit LJ, Schwartz HF, and Mohan SK, 2006. Sequence diversity of the nucleoprotein gene of Iris yellow spot virus (genus Tospovirus, family Bunyaviridae) isolates from the western region of the United States. Archives of Virology 151: 1015–1025.
Pourrahim R, Farzadfar S, Moini  A, Shahraeen N and Ahoonmanesh A, 2001. First report of  Tomato spotted wilt virus on potatoes in Iran. Plant Disease 85: 442-442.
Rizos H, Gunn LV, Pares RD and Gillings RM, 1992. Differentiation of cucumber mosaic virus isolates using the polymerase chain reaction. Journal of General Virology, 73:2099-2103.
Rowhani A, Chay C, Golino DA and Falk W, 1993. Development of a polymerase chain reaction technique for the detection of grapvein fanleaf virus in grapvein tissue. Phytopathology 83:749-753.
Sokhandan bashir N, Nematollahi S and Torabi E, 2008. Cucumber mosaic virus subgroup IA frequently occurs in the northwest Iran. Acta virologica 52: 237 – 242.
Sokhandan Bashir N, Rasaei Kalhor M and Nourinejhad Zarghani S, 2006. Detection, differentiation and phylogenetic analysis of cucumber mosaic virus isolates from cucurbits in the northwest region of Iran. Virus Genes 32:277-288.
Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A and Kuma S, 2013. MEGA6: molecular evolutionary genetics analysis version 6.0. Molecular Biology and Evolution 30:2725-2729.
Tsompana M, Abad J, Purugganan M and Moyer J, 2005. The molecular population genetics of the Tomato spotted wilt virus (TSWV) genome. Molecular Ecology 14: 53-66.
Vinayarani G, Madhusudhan KN, Deepak SA, Niranjana SR and Prakash HS, 2011. Detection of mixed infection of tobamoviruses in tomato and bell pepper by using RT-PCR and Duplex RT-PCR. International Journal of Plant Pathology 2: 89-95.
Whitfield AE., Ullman  DE and German TL, 2005. Tospovirus-thrips interactions. Annual Review of Phytopathology 43: 459-489.
Zaitlin M, 2000. Tobacco mosaic virus. Description of plant viruses. http:// www.dpv.net/ dpv= 370.